Detection of non-tuberculosus mycobacteria (NTMs) in lung samples using 16S rRNA

BACKGROUND Non-tuberculous mycobacteria (NTMs) cause diseases known as mycobacteriosis and are an important cause of morbidity and mortality. The diagnosis of pulmonary disease caused by NTM is hampered by its clinical similarity with tuberculosis (TB) and by the lack of an accurate and rapid laboratory diagnosis. OBJECTIVES Detect DNA from NTMs directly from lung samples using real-time polymerase chain reaction (qPCR) for amplification of 16S rRNA. Additionally, DNA sequencing (hsp65 and rpoB genes) was used to identify the species of MNTs. METHODS A total of 68 sputum samples (54 with suspected NTMs and 14 with TB) from patients treated at a referral hospital were used. FINDINGS Of these, 27/54 (50%) were qPCR positive for NTMs and 14/14 TB patients (controls) were qPCR negative with an almost perfect concordance (Kappa of 0.93) with the Mycobacterium spp. culture. Sequencing confirmed the presence of NTM in all positive samples. The most common species was Mycobacterium gordonae (33%), followed by Mycobacterium abscessus (26%), Mycobacterium fortuitum (22%), Mycobacterium avium (15%) and Mycobacterium peregrinum (4%). MAIN CONCLUSIONS The qPCR technique for detecting NTMs targeting 16S rRNA has the potential to detect NTMs and rapidly differentiate from Mycobacterium tuberculosis. However, it is necessary to identify the species to help in the differential diagnosis between disease and contamination, and to guide the choice of the therapeutic scheme.

Nontuberculous mycobacterial lung disease in a high tuberculosis incidence setting in Brazil / Doença pulmonar por micobactérias não tuberculosas em uma região de alta incidência de tuberculose no Brasil

ABSTRACT Objective: The incidence of lung disease caused by nontuberculous mycobacteria (NTM) has been increasing worldwide. In Brazil, there are few studies about nontuberculous mycobacterial lung disease (NTMLD), and its prevalence is yet to be known. Our objective was to determine the specific etiology of the disease in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, as well as the frequency and diversity of NTM species in our sample of patients. Methods: This is a retrospective analysis of the medical records of patients diagnosed with NTMLD treated in a referral center located in the city of Porto Alegre, Brazil, between 2003 and 2013. Results: Our sample comprised 100 patients. The most prevalent NTM species were Mycobacterium avium complex (MAC), in 35% of the cases; M. kansasii, in 17%; and M. abscessus, in 12%. A total of 85 patients had received previous treatment for tuberculosis. Associated conditions included structural abnormalities in the lungs, such as bronchiectasis, in 23% of the cases; COPD, in 17%; and immunosuppressive conditions, such as AIDS, in 24%. Conclusions: MAC and M. kansasii were the most prevalent species involved in NTMLD in the state, similarly to what occurs in other regions of Brazil. Data on regional epidemiology of NTMLD, its specific etiology, and associated conditions are essential to establish appropriate treatment, since each species requires specific regimens. Most patients with NTMLD had received previous tuberculosis treatment, which might lead to development of resistance and late diagnosis.

RESUMO Objetivo: A incidência de doença pulmonar causada por micobactérias não tuberculosas (MNT) tem aumentado em todo o mundo. No Brasil, há poucos estudos sobre doença pulmonar por MNT, e sua prevalência ainda não é conhecida. Nosso objetivo foi determinar a etiologia específica da doença no estado do Rio Grande do Sul, bem como a frequência e a diversidade das espécies de MNT em nossa amostra de pacientes. Métodos: Análise retrospectiva dos prontuários de pacientes diagnosticados com doença pulmonar por MNT atendidos em um centro de referência localizado na cidade de Porto Alegre, RS, entre 2003 e 2013. Resultados: Nossa amostra foi composta por 100 pacientes. As espécies de MNT mais prevalentes foram Mycobacterium avium complex (MAC, complexo M. avium), em 35% dos casos; M. kansasii, em 17%; e M. abscessus, em 12%. Um total de 85 pacientes havia feito tratamento anterior para tuberculose. Condições associadas incluíram anormalidades estruturais nos pulmões, como bronquiectasias, em 23% dos casos; DPOC, em 17%; e condições imunossupressoras, como AIDS, em 24%. Conclusões: MAC e M. kansasii foram as espécies mais prevalentes envolvidas na doença pulmonar por MNT no estado, à semelhança do que ocorre em outras regiões do Brasil. Dados sobre a epidemiologia regional da doença pulmonar por MNT, sua etiologia específica e condições associadas são fundamentais para se estabelecer um tratamento adequado, já que cada espécie requer um esquema específico. A maioria dos pacientes com doença pulmonar por MNT havia feito tratamento anterior para tuberculose, o que pode levar a desenvolvimento de resistência e diagnóstico tardio.

The influence o hiv-1 subtypes c, crf31_bc andb on disease progression and innitial virologic response to haart in a southern Brazilian cohort / A influência dos subtipos C, CRF31_BC e B do vírus HIV-1 na progressão da infecção e resposta virológica inicial a terapia antirretroviral em uma coorte no sul do Brasil

Background: Although most HIV-1 infections in Brazil are due to subtype B, Southern Brazil has a high prevalence of subtype C and recombinant forms, such as CRF31_BC. This study assessed the impact of viral diversity on clinical progression in a cohort of newly diagnosed HIV-positive patients. Methods: From July/2004 to December/2005, 135 HIV-infected patients were recruited. The partial pol region was subtyped by phylogeny. A generalized estimating equation (GEE) model was used to examine the relationship between viral subtype, CD4+ T cell count and viral load levels before antiretroviral therapy. Hazard ratio (Cox regression) was used to evaluate factors associated with viral suppression (viral load < 50 copies/mL at six months). Results: Main HIV-1 subtypes included B (29.4%), C (28.2%), and CRF31_BC (23.5%). Subtypes B and C showed a similar trend in CD4+ T cell decline. Comparison of non-B (C and CRF31_BC) and B subtypes revealed no significant difference in the proportion of patients with viral suppression at six months (week 24). Higher CD4+ T cell count and lower viral load were independently associated with viral suppression. Conclusion: No significant differences were found between subtypes; however, lower viral load and higher CD4+ T cell count before therapy were associated with better response.

Introdução: Embora a maioria das infecções de HIV-1 no Brasil seja devido ao subtipo B, o Sul do Brasil apresenta uma alta prevalência do subtipo C e formas recombinantes, como CRF31_BC. Este estudo avaliou o impacto da diversidade viral na evolução clínica em uma coorte de pacientes HIV-positivos recém diagnosticados. Métodos: De julho/2004 a dezembro/2005, 135 pacientes anti-HIV reagentes foram recrutados. A região pol parcial foi subtipada por filogenia. Um modelo de equação de estimativa generalizada (GEE) foi utilizado para examinar a relação entre subtipo viral, contagem de células CD4 e níveis de carga viral pré-terapia antirretroviral. Hazard ratio (regressão de Cox) foi utilizada para avaliar os fatores associados à supressão viral (carga viral < 50 cópias/mL em seis meses). Resultados: Os principais subtipos de HIV-1 incluíram B (29,4%), C (28,2%) e CRF31_BC (23,5%). Os subtipos B e C apresentaram uma tendência semelhante no declínio de células CD4. Quando comparados os subtipos não B (C e CRF31_BC) e B, não houve diferença significativa na proporção de pacientes com supressão viral aos seis meses (24 semanas). CD4 mais alto e carga viral mais baixa demonstraram associação independente com supressão viral. Conclusão: Não houve diferença significativa entre os subtipos; entretanto, viremia mais baixa e CD4 mais alto pré-terapia mostraram associação com melhor resposta.

High prevalence and association of HIV-1 non-B subtype with specific sexual transmission risk among antiretroviral naïve patients in Porto Alegre, RS, Brazil / Alta prevalência e associação do subtipo não-B do vírus HIV-1 com risco específico de transmissão sexual entre pacientes virgens de tratamento antirretroviral em Porto Alegre, Brasil

In South Brazil the circulation of two HIV-1 subtypes with different characteristics represents an important scenario for the study of the impact of HIV-1 diversity on the evolution of the HIV-1 epidemic and AIDS disease. HIV-1 B, the predominant variant in industrialized countries and HIV-1 C, the most prevalent subtype in areas with rapid epidemic growth, are implicated in most infections. We evaluated blood samples from 128 antiretroviral (ARV) naïve patients recruited at entry to the largest HIV outpatient service in Porto Alegre. Based on partial pol region sequencing, HIV-1 C was observed in 29 percent, HIV-1 B in 22.6 percent and, the recently identified CRF31_BC, in 23.4 percent of 128 volunteers. Other variants were HIV-1 F in 10 percent and other mosaics in 5.5 percent. In order to evaluate the association of socio-behavioral characteristics and HIV-1 subtypes, interviews and laboratory evaluation were performed at entry. Our data suggest an established epidemic of the three major variants, without any evidence of partitioning in either of the subgroups analyzed. However, anal sex practices were associated with subtype B, which could indicate a greater transmissibility of non-B variants by vaginal intercourse. This study provides baseline information for epidemiologic surveillance of the changes of the molecular characteristics of HIV-1 epidemics in this region.

No sul do Brasil a circulação de dois subtipos de HIV-1 com características diferentes representa importante cenário para o estudo do impacto da diversidade do HIV-1 na evolução da epidemia e na AIDS. O HIV-1 B, variante predominante nos países industrializados e o HIV-1 C, o subtipo mais prevalente em áreas com maiores taxas de crescimento da epidemia, estão implicados na maioria das infecções. Avaliamos amostras de sangue de 128 pacientes sem exposição a antirretrovirais, recrutados ao ingressarem no maior serviço ambulatorial de HIV/AIDS de Porto Alegre. Com base no sequenciamento parcial da região pol, o HIV-1 C foi observado em 29 por cento, HIV-1 B em 22,6 por cento e uma forma recombinante recentemente descrita, CRF31_BC, foi observada em 23,4 por cento entre 128 voluntários. Outras variantes encontradas foram HIV-1 F em 10 por cento e outros mosaicos em 5,5 por cento. Para avaliar associações entre características sócio-comportamentais e subtipos do HIV-1 foram realizadas entrevistas e exames laboratoriais na entrada do estudo. Nossos dados sugerem uma epidemia estabelecida dessas três variantes principais, sem evidência de compartilhamento em nenhum subgrupo analisado. Entretanto, prática sexual anal se mostrou associada à transmissão de subtipo B, o que pode indicar maior transmissibilidade das variantes não-B por intercurso vaginal. Este estudo permite delinear uma linha de base para o monitoramento epidemiológico das mudanças nas características moleculares da epidemia do HIV-1 nesta região.

Carcinoma brônquico e tabagismo: análise de 667 casos / Bronchial carcinoma and smoking habit: analysis of 667 cases

Os objetivos do trabalho säo verificar a freqüência dos tipos histológicos, sua relaçäo com o tabagismo, a faixa etária e o sexo predominante e, 667 pacientes que foram submetidos à broncofibroscopia e que tiveram carcinoma brônquico confirmado por exame etiológico e/ou histológico. Foram avaliados especialmente os tipos histológicos mais freqüentes que foram o carcinoma epidermóide, com 60,25% dos casos, o carcinoma indiferenciado de pequenas células, com 13,34% dois casos e o adenocarcinoma, com 12,59% dos casos. O carcinoma brônquico ocorreu preferencialmente nos fumantes, com 92,35% dos casos, a idade média de incidência foi 60,66 anos e houve predominância do sexo masculino, com 84,41% dos casos